改变表达系统改变了复合人S100A9的寡合化和促炎活性

科学领域:

• 免疫学 免疫学 免疫学
• 分子生物学分子生物学
• 蛋白质生物化学 蛋白质生物化学

背景情况:

• S100A9充当损伤相关分子模式 (DAMP),通过托尔类受体4 (TLR4) 触发天生的免疫力.
• 之前对S100A9的作用机制的研究主要使用了以大肠杆菌 (S100A9^ec) 来表达的蛋白质,这引发了对潜在的脂多糖酸盐 (LPS) 污染的担忧,因为TLR4也被LPS激活.

研究的目的:

• 调查S100A9寡合体状态在TLR4激活中的作用,独立于LPS污染.
• 描述在昆虫细胞 (S100A9ⁱⁿ) 中产生的无LPS重组S100A9,并将其活性与S100A9^ec进行比较.

主要方法:

• 在昆虫细胞中生产和净化无LPS的S100A9 (S100A9).
• 生物化学表征S100A9ⁱⁿ,包括对寡合体状态和TLR4激活的评估.
• 功能性试验涉及S100A9寡合化中断使用SlyD.

主要成果:

• 没有LPS的S100A9ⁱⁿ没有激活TLR4,与S100A9^ec不同.
• 缺乏活性并不是由于LPS污染,蛋白质错折,净化问题或酸化变化造成的.
• 与S100A9^ec相比,S100A9ⁱⁿ表现出一个改变的寡合状态.
• 通过使用SlyD. 破坏S100A9中的寡合体形成来实现S100A9活动的恢复.

结论:

• S100A9的寡合状态是其激活TLR4.4的能力的关键决定因素.
• 重组表达系统可以影响S100A9的寡合状态,从而影响其生物活性.
• 这一发现需要在未来对S100A9功能的研究中仔细考虑蛋白质生产方法.