从人体血样本获得EV丰富的优化工作流程,用于下游质谱分析

科学领域:

• 生物化学 生化学
• 在瘤学瘤学.
• 生物标志物发现发现

背景情况:

• 改善膀和前列腺癌的预后需要特定的生物标志物用于早期检测和治疗分层.
• 血中的细胞外囊泡 (EVs) 是癌症生物标志物,但由于干扰血蛋白质,它们的隔离具有挑战性.
• 高纯度的EV样本对于下游应用,如质谱 (MS) 非常重要.

研究的目的:

• 为了比较一种新的EV丰富方法 (DCC-SEC度) 与商业套件和未经加工的等离子体.
• 评估新型EV丰富方法中的单个步骤的有效性.
• 为生物标志物研究从血中分离纯EV的优质方法.

主要方法:

• 使用密度离心法 (DCC),大小排除色谱法 (SEC) 和度的定制EV丰富协议的开发.
• 将定制方法 (方法1) 与exoRNeasy midi套件 (方法2) 和未经加工的血进行比较.
• 在丰富样本中分析EV和污染蛋白标记物.

主要成果:

• 定制的DCC-SEC度方法产生了具有最高水平的EV和外体标记物的EV样本.
• 与其他方法相比,这种方法还显示出高丰富度的血蛋白水平明显较低.
• 方法1的个别步骤在从血中丰富EV方面是有效的.

结论:

• DCC,SEC和度的组合是从等离子体中丰富EV的一种高度有效的方法.
• 这种方法提供了高纯度的EV分离物,适合发现基于EV的新型癌症生物标志物.
• 这种技术有望促进膀和前列腺癌的早期检测和治疗分层.