氨基酸编码用于快速和完整的蛋白质生物结合
Alex J Eddins1,2, Abigail H Pung1,2, Richard B Cooley1,2
1Department of Biochemistry and Biophysics, Oregon State University, 2011 Agricultural and Life Sciences, Corvallis, OR, USA.
Bio-protocol
|August 30, 2024
概括
这项研究介绍了一种使用遗传密码扩展在大肠杆菌中高效生产Tet2标记蛋白质的协议. 该方法能够快速,特定于位点的蛋白质与跨循环 octene 组结合,这对于生物直角化学应用至关重要.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分子生物学分子生物学
- 合成生物学 合成生物学
背景情况:
- 蛋白质结合对于各种生物应用是必不可少的.
- 传统方法通常需要对氨酸进行操纵,从而限制了网站特异性和效率.
- 生物对角联结为精确的蛋白质标记提供了一个强大的替代方案.
研究的目的:
- 开发一种高产量的协议,用于表达E. coli中的准备结合的蛋白质.
- 为了使得四氨基酸 (Tet2) 能够在特定地点内进行合并,以进行生物直角结合.
- 为了便于快速和定量地附加含有转环氧 octene (TCO) 的标签.
主要方法:
- 使用优化遗传密码扩展 (GCE) 系统 (Tet2 pAJE-E7) 来编码Tet2在TAG停止编码子.
- 采用BL21大肠杆菌菌株,包括B95的衍生物,以尽量减少过早的切断.
- 开发了一种为期四天的Tet2蛋白表达自诱导协议,实现了高产量 (~200 mg/L).
主要成果:
- 实现了>95%的Tet2-蛋白的编码和标记保真度.
- 在室温和生理pH下,在5分钟内与TCO组进行量化反应.
- 通过使用sTCO-PEG5000的凝电泳运动转移试验验证了Tet2的纳入和反应性.
结论:
- 开发的协议提供了一种强大而高效的方法来生产标记为Tet2的蛋白质.
- 这种方法可以实现快速,特定地点和定量生物对等蛋白质结合.
- 该协议可适应各种蛋白质结构,并可针对特定应用进行优化.
关键词:
1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 2 1 1 1 1 1 1 2 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 2 2 1 1 1 1 1 1 2 2 1 1 1 1 1 1 1 1 2 2 2 1 1 1 1 1 2 2 1 1 1 1 1 1 1 2 2 2 1 1 1 1 1 1 1 1 2 2 1 1 1 1 1 2 2 1 1 1 1 1 2 1 1 1 1 1 2 1 1 1 2 1 1 1 1 2 1 1 1 2 1 1 1 1 2 1 1 1 1 1 2 1 1 1 1 1 1 1 1 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 known known known known known known known known known known known known known known known2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 3 3 4 1 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 14 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 5 5 5 5 6 6 7 7 7 7 7 8 8 8 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 including including including including including including including including including including including including5 - 四氨酸 (Tet) 的使用氨基酸tRNA合成酶/tRNA对 (aaRS/tRNA) 是一种生物对角的生物对角.遗传密码扩展 (GCE) 是一种方法.近同类抑制近同类抑制非正规氨基酸 (ncAA) 是一种非正规的氨基酸.压缩的跨环氧 octene (sTCO) 的压缩.
