在大西洋鱼细胞中探索用于增强转基因和sgRNA表达的替代促进剂的使用

科学领域:

• 水产养殖和基因编辑
• 分子生物学和促进体的表征.
• 鱼类中的转基因技术

背景情况:

• 在大西洋鱼中有效的基因编辑需要优化表达载体和工具.
• 了解促进体活性对于增强鱼的转基因表达至关重要.
• 异质和内源促进体在控制生物技术应用中的基因表达方面发挥着关键作用.

研究的目的:

• 描述大西洋鱼细胞中各种异质和内源促进体的活性.
• 为了确定小导向RNA (sgRNA) 和聚合酶II型 (pol II) 表达的最佳促进体.
• 为设计用于大西洋鱼基因编辑的改进表达载体提供见解.

主要方法:

• 使用定量PCR (qPCR) 来评估不同U6促进体对sgRNA表达的活性.
• 用露西法酶试验来评估各种聚合酶II型 (pol II) 促进剂的性能.
• 分析了促进子序列,包括扩展到起始编码子和突变特定动机 (例如,PRDM1) 等修改.

主要成果:

• 人类U6 (hU6) 和鱼U6 (tU6) 促销器在测试的U6促销器中表现出最高的活性.
• 异种促进剂 (CMV,hEF1α核心) 显示出比内源大西洋鱼促进剂 (sHSP8,sNUC3L,sEF1α) 更大的活性.
• 在内源性pol II促进体中,sEF1α和sHSP8表现出更高的活性;延长序列和PRDM1动机对表达产生了积极影响.

结论:

• 该研究确定了大西洋鱼细胞中sgRNA和pol II表达的高度活性促进物.
• 这些发现有助于设计更有效的lentivirus工具和表达载体,用于大西洋鱼基因编辑.
• 了解PRDM1动机等促进元件可以指导未来增强转基因表达的策略.