优化了从接种疫苗的捐赠者的单个外周血液细胞表达人类单克隆抗体的方法
Sandra Omejec1, Manuela Tompa2, Valerija Kovač2
1Centre for Immunology and Developement, Blood Transfusion Centre of Slovenia, Šlajmerjeva 6, SI-1000 Ljubljana, Slovenia; Faculty of Medicine, University of Ljubljana, 1000 Ljubljana, Slovenia.
Journal of immunological methods
|August 30, 2024
概括
这项研究提出了一种新方法来分离抗原特异性B细胞以产生人类单克隆抗体. 这种方法提供了一种更有效的方式来产生用于研究和治疗的治疗抗体.
科学领域:
- 免疫学 免疫学 免疫学
- 生物技术是生物技术.
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 人类单克隆抗体对于诊断,研究和治疗至关重要.
- 单个B细胞技术已经进步,克服了老方法隔离特定B细胞种群的局限性.
研究的目的:
- 描述一种简单而有效的方法,用于从接种疫苗的捐赠者中分离抗原特异性等离子体和记忆B细胞.
- 为了放大免疫球蛋白可变区域基因产生人类重组单克隆抗体.
主要方法:
- 在分类之前,将B细胞与外周血液单核细胞分离.
- 使用表面标记物 (CD19,CD27,IgG) 和乙型肝炎表面抗原 (HBsAg) 结合的抗原特异性B细胞的鉴定.
- 单细胞逆转录和聚合酶链反应 (RT-PCR) 用于基因放大,然后克隆成表达载体并转化为HEK293T/17细胞.
主要成果:
- 免疫球蛋白可变区域基因的成功放大具有不同效率 (重链最高68%,兰巴达轻链最低22%).
- 70%的转染细胞产生重组单克隆抗体,其度约为4微克/毫升.
- 7%的产生的抗体被证明与HBsAg结合.
结论:
- 描述的协议使得从外围血液中生成完全人类单克隆抗体.
- 与小鼠或菌体显示抗体相比,这些抗体在特异性和自我耐受性方面具有优势.
- 该方法适用于产生针对各种抗原的人类单克隆抗体,用于免疫治疗和研究.
