在捕获-SELEX中探索目标度的下限,使用瓜宁作为模型目标

科学领域:

• 生物化学 生化学
• 分子生物学分子生物学
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 阿帕特默选择旨在识别高亲和度核酸结合剂.
• 在选择过程中较低的度度可以产生具有较高结合亲和力的阿马.
• 在aptamer选择中目标度的下限存在的可能性仍未得到充分研究.

研究的目的:

• 为了研究成功选择aptamer的目标度的下限.
• 为了确定不同度的度对胺酶丰富度和亲和力的影响.
• 了解目标度,选择回合和阿巴 K_d值之间的关系.

主要方法:

• 在5μM,500nM和50nM的度下,使用瓜宁作为标进行了三次并行aptamer选择.
• 监测了不同度和选择轮的关氨酸合体的成功丰富.
• 进行了突变研究,以调查胺酶结合机制和选择性.

主要成果:

• 在5μM (8轮) 和500nM (17轮) 瓜宁度下,成功实现了阿普坦富化.
• 在50nM的瓜宁度下,没有观察到成功的阿普坦富化.
• 最高亲和度的阿普坦体呈现出200nm的K_d.
• 突变研究确定了关键的细胞因子残留物,负责关氨酸结合,其突变改变了对腺因的选择性.

结论:

• 在aptamer选择中,目标度的下限存在,50nM的关氨酸不足以进行成功的丰富.
• 所需的选择轮的数量与初始目标度相反相关.
• 对最佳目标度选择的洞察力对于使用捕获-SELEX等方法高效地发现aptamer至关重要.