在Fusobacterium nucleatum中开发基于SacB的对抗选择以实现有效的等位基交换

科学领域:

• 微生物学 微生物学
• 遗传学 是一个遗传学.
• 口腔健康 口腔健康

背景情况:

• Fusobacterium nucleatum是一种关键的口腔细菌,与人类健康有关.
• 基因操纵工具正在推动F. nucleatum在生物膜和宿主相互作用中的作用的研究.
• 基于反选择的未标记的框架内突变方法对于遗传研究是有效的.

研究的目的:

• 测试 sacB 基因作为 F. nucleatum. 的反选择性标记物的有效性.
• 开发一种新的方法,在没有对宿主进行修改的情况下,在F. nucleatum中产生未标记的基因突变.
• 通过基于 sacB 的反选择来创造 F. nucleatum 突变.

主要方法:

• 来自Bacillus subtilis的sacB基因通过穿或自杀等离子体被引入F. nucleatum.
• 表达 sacB 的 F. nucleatum 菌株经过了糖糖反选择.
• 在hslO位点进行了tonB基因和 luciferase基因敲击的内框架删除.

主要成果:

• 表达sacB的F.核对补充的糖糖表现出致命的敏感性.
• 糖的反选择有效导致染色体等离子体的损失.
• 在野生类型的F. nucleatum.中,成功地实现了tonB的无标记的框架内删除和光酶的精确敲定.

结论:

• 基于sacB的反选择技术是产生F. nucleatum.未标记基因突变的可靠方法.
• 这种方法扩大了F. nucleatum研究的遗传工具包.
• 由于糖糖很容易获得,这使其成为一种实用且广泛适用的技术.