代谢工程通过改变细胞外囊封闭的AAV的脂质组成来提高转导效率和下游载体隔离

科学领域:

• 基因治疗 基因治疗
• 分子工程分子工程分子工程
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 腺相关病毒 (AAV) 是有效的基因疗法载体,但面临诸如先前存在的免疫力和低细胞类型效率等挑战.
• 目前的AAV生产方法需要复杂的下游净化过程来将病毒颗粒从细胞碎片和自由病毒中分离出来.

研究的目的:

• 开发一种代谢工程策略,以增强细胞外囊封闭AAV (EV-AAV) 的产生和净化.
• 改进工程AAV载体的传导效率和体内性能.

主要方法:

• 通过淘汰脂胺酶合成酶1 (PTDSS1) 来生成一种脂质工程HEK293T-ΔPTDSS1细胞系.
• 量化了生产细胞的超级生物中的EV-AAV与自由AAV的比率.
• 分析了工程EV-AAV9 (mEV-AAV9) 的膜组成,并评估了其体外和体内传导效率.

主要成果:

• 与野生类型细胞相比,HEK293T-ΔPTDSS1细胞系显示了EV-AAV9的42.7倍丰富,自由AAV9的300倍减少.
• 膜工程EV-AAV9 (mEV-AAV9) 呈现出改变的脂质组成,包括胆固醇丰富.
• 与传统的EV-AAV9相比,mEV-AAV9在心肌细胞中的转导效率增加了1.5倍,与非包裹的AAV9相比增加了11倍.
• 在mEV-AAV9.9的宫内膜内给药四周后,在小鼠大脑中观察到强大的体内传导.

结论:

• 脂质代谢工程是一种可行的策略,可以增强EV-AAV的生产并简化下游处理.
• 工程化EV-AAV载体表现出改进的转导效率和体内疗效,有望用于先进的基因治疗应用.