增强的ER蛋白加工基因表达增加了HEK293细胞中的rAAV产量和全囊比率
Qiang Fu1, Yongdan Wang2, Jiansong Qin1
1Department of Biomedical Engineering and Biotechnology, University of Massachusetts Lowell, Lowell, MA, 01854, USA.
Applied microbiology and biotechnology
|September 4, 2024
概括
在HEK293细胞中增强复合腺相关病毒 (rAAV) 生产,涉及过度表达内质网膜 (ER) 蛋白质处理基因. 这显著提高了基因治疗应用的rAAV产量和质量.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 基因治疗 基因治疗
- 细胞生物学 细胞生物学
背景情况:
- 再组合腺相关病毒 (rAAV) 载体对于基因疗法至关重要,但面临制造限制.
- 人类胚胎 (HEK) 细胞容量是rAAV商业化的一个瓶.
- 研究了细胞内膜网膜 (ER) 蛋白质处理和亡途径在rAAV产生中的作用.
研究的目的:
- 研究特定基因 (XBP1,GADD34/PPP1R15A,HSPA6,BCL2) 对HEK293细胞中短暂的rAAV产生的影响.
- 为了确定这些基因的过度表达是否可以提高rAAV产量和质量.
- 了解父细胞生产率与基因过度表达的有效性之间的关系.
主要方法:
- 根据转录基因数据选择了四个候选基因 (XBP1,GADD34/PPP1R15A,HSPA6,BCL2).
- 稳定地将这些基因集成到HEK293宿主细胞中.
- 利用传统的三重等离子体过渡转染来评估工程细胞和家长控制中的rAAV生产.
主要成果:
- 在HEK293T细胞中,XBP1,HSPA6和GADD34的过度表达增加了高达100%的rAAV生产率和高达78%的特定rAAV生产率.
- 在不同的HEK293细胞系和AAV血清型 (AAV2,AAV8) 中观察到改善,尽管程度不同.
- 与低生产条件相比,在高生产的亲细胞中,提高生产率更为显著.
结论:
- 优调ER蛋白处理基因 (XBP1,HSPA6,GADD34) 是一种可行的策略,可以显著增加rAAV的产生.
- 这种方法增强了病毒粒子合成,囊组装和整体载体产量.
- 优化ER蛋白加工通路为克服基因治疗载体生产中的制造障碍提供了一个有希望的途径.
