尺寸和光校准成像流动细胞计:从任意到标准单位
Wouter W Woud1, Haley R Pugsley2, Britta A Bettin3,4,5
1Erasmus MC Transplant Institute, Department of Internal Medicine, University Medical Center Rotterdam, Rotterdam, The Netherlands.
概括
本研究介绍了一种在成像流细胞计 (IFCM) 中校准侧散射 (SSC) 信号的方法,以准确确定细胞外囊泡 (EV) 大小. 这种标准化提高了不同仪器和实验室的数据可比性,提高了电动汽车研究的可靠性.
科学领域:
- 生物医学工程 生物医学工程
- 分析化学 分析化学
- 细胞生物学 细胞生物学
背景情况:
- 影像流细胞计 (IFCM) 能够在没有先前隔离的情况下,在复杂的生物流体中检测,大小和表型化细胞外囊泡 (EVs).
- 目前的IFCM数据解释受到侧向散射 (SSC) 信号中任意单位的阻碍,使仪器间和机构间的比较复杂化.
- 光信号的标准化校准是可以实现的,但SSC信号校准仍然是IFCM的一个重大挑战.
研究的目的:
- 在IFCM中开发和介绍一种将SSC信号与粒子大小相关的方法.
- 通过使用标准化等离子体EV测试样本 (PEVTES) 对三种不同的IFCM仪器进行比较性研究.
- 提高使用IFCM的EV测量的标准化和可重复性.
主要方法:
- 开发了一种方法来校准IFCM SSC信号以使用聚钢 (PS) 和空心有机珠 (HOBs) 用405nm激光对粒子大小进行校准.
- 应用了Mie理论,将散射信号与粒子大小相关联,实现确定系数>0.99.
- 通过使用MESF珠进行光校准,并在两个实验室使用染色PEVTES在三个IFCM中进行尺寸/光校准.
主要成果:
- 成功地将IFCM SSC信号与颗粒大小相关联,81nm PS珠从背景中可辨别.
- 证明检测了216nm的HOBs,证实了SSC对EV检测的灵敏度,下一个尺寸极限为~100nm.
- 尺寸和光校准将EV度比较的变化系数从33%降低到21%,显著改善了仪器间的可比性.
结论:
- 介绍了使用405nm激光对IFCM进行的第一个散射校准,产生了与敏感的商业流细胞计可比的散射-直径关系.
- 开发的校准方法通过提供强大的标准化和可重复性来提高IFCM对电动汽车研究的可靠性.
- 这种标准化对于理解电动汽车的生物学意义和促进多中心研究至关重要.
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