深入的宿主细胞蛋白质分析和病毒蛋白质不纯度监测在基因疗法产品中使用优化的宽窗数据依赖获取方法

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 分析化学 分析化学
• 基因治疗 基因治疗

背景情况:

• 剩余宿主细胞蛋白 (HCP) 是蛋白质治疗中的关键质量属性,但它们在腺相关病毒 (AAV) 基因治疗产品中的分析具有挑战性.
• 现有的基于质谱 (MS) 的HCP分析方法,通常是针对单克隆抗体 (mAbs) 开发的,由于样本具有独特的特征,如低蛋白度和表面活性剂的存在,因此不能直接应用于AAV.

研究的目的:

• 开发一种基于质谱学的新,强大和敏感的工作流程,用于对AAV样本进行全面的HCP分析.
• 改进检测和量化低丰度的HCP,并确定AAV基因治疗产品中的过程相关的病毒蛋白质.

主要方法:

• 开发一种新的工作流程,结合宽窗数据依赖采集 (DDA) 来增强低丰度HCP检测.
• 整合单,固相增强样品制备 (SP3) 进行高效的低投入样品制备.
• 在商业AAV1和内部生产的AAV样本中应用开发的方法来分析HCP.

主要成果:

• 这种新方法在商业AAV1样本中识别了650多个HCP,具有很高的定量可重复性,与传统溶液消化和DDA.相比增加了5倍以上.
• 该方法表明0.06 ng/mL的低检测极限,使得HCP覆盖范围更全面.
• 首次确定了几种与过程相关的病毒蛋白 (例如Rep 78,E4),突出显示了潜在的免疫性风险.

结论:

• 开发的MS工作流提供了一种强大而敏感的方法,用于对AAV基因疗法产品的深入HCP分析.
• 这种方法显著提高了HCP的识别和量化,这对于确保AAV产品的安全性和质量至关重要.
• 识别与过程相关的病毒蛋白为AAV过程开发和风险评估提供了宝贵的见解.