在增殖和分化阶段,对山羊骨架肌肉卫星细胞中参考基因稳定性的评估
Siyuan Zhan1,2, Lufei Zhang1,2, Tao Zhong1,2
1Key Laboratory of Livestock and Poultry Multi-Omics, Ministry of Agriculture and Rural Affairs, College of Animal and Technology, Sichuan Agricultural University, Chengdu 611130, China.
Animals : an open access journal from MDPI
|September 14, 2024
概括
识别最佳基因对准确的基因表达研究在山羊肌肉发育至关重要. 验证了RPL14和RPS15A作为山羊肌肉卫星细胞的最佳参考基因,表现优于传统基因.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 发展生物学 发展生物学
- 动物科学动物科学
背景情况:
- 骨肌肉的发育依赖于精确的基因调节.
- 准确的基因表达概况对于理解肌肉发育至关重要.
- 选择适当的参考基因对于定量基因表达分析至关重要,例如实时定量PCR (RT-qPCR).
研究的目的:
- 在山羊骨肌卫星细胞 (MuSCs) 中进行基因表达研究的稳定参考基因的识别和验证.
- 评估传统参考基因 (ACTB,GAPDH) 和新型候选基因的适用性,以在山羊细胞中进行RT-qPCR规范化.
- 建立一种可靠的方法,在山羊 MuSC 增殖和分化过程中规范基因表达数据.
主要方法:
- 候选参考基因被确定使用转录组测序的山羊 MuSCs.
- 用RT-qPCR量化基因表达水平.
- 使用GeNorm,NormFinder,BestKeeper和RefFinder算法评估了八个候选基因和两个传统基因的表达稳定性.
- 用验证的参考基因来规范目标基因PCNA和Myf5.5的表达.
主要成果:
- 传统的参考基因ACTB和GAPDH显示出显著的变异性,不适合正常化.
- 通过RNA测序识别的RPL14和RPS15A显示出最小的表达变异性.
- RPL14和RPS15A被确定为山羊MuSCs最稳定和最优的参考基因.
- 使用验证的参考基因,PCNA和Myf5的表达得到了成功的正常化.
结论:
- 像ACTB和GAPDH这样的常规参考基因在山羊MuSCs中的基因表达正常化方面不可靠.
- RPL14和RPS15A是推的最佳基因参考基因,用于精确的基因表达分析,用于增殖和区分山羊MuSCs.
- 这项研究提供了一组经过验证的参考基因,这些基因对于通过RT-qPCR在山羊肌肉卫星细胞中可靠地检测差异基因表达至关重要.
