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Updated: Jun 13, 2025

Efficient Generation of hiPSC Neural Lineage Specific Knockin Reporters Using the CRISPR/Cas9 and Cas9 Double Nickase System

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Published on: May 28, 2015

一个p21报告员iPSC线用于评估CRISPR-Cas9和载体诱导的应激反应

Yi-Dan Sun^1,2, Guo-Hua Li^1,2, Feng Zhang^1,2

¹State Key Laboratory of Experimental Hematology, National Clinical Research Center for Blood Diseases, Haihe Laboratory of Cell Ecosystem, Institute of Hematology & Blood Diseases Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Tianjin 300020, People's Republic of China.

Stem cells (Dayton, Ohio)

|September 16, 2024

概括

一个新的记者细胞系在CRISPR-Cas9基因编辑后跟踪TP53-p21通路激活. 该工具有助于选导向RNA并评估载体安全性,发现对敏感细胞更安全的lentiviral载体.

科学领域:

分子生物学分子生物学
基因编辑技术的技术
细胞响应途径细胞响应途径

背景情况:

CRISPR-Cas9基因编辑激活TP53-p21通路,但传递方法的影响尚不清楚.
评估路径激活对于安全的基因编辑应用至关重要.

研究的目的:

在CRISPR-Cas9编辑过程中开发一个监测TP53-p21通路激活的报告系统.
评估不同基因编辑组件和传递载体对p21激活的影响.
在敏感细胞类型中确定基因治疗的最佳载体.

主要方法:

一个p21-mNeonGreen记者诱导多能干细胞 (iPSC) 线的生成.
流细胞计分析以量化p21表达和indel频率.
通过各种传递方法诱导的p21激活的比较:寡氧核酸 (ODN),腺相关病毒载体 (AAV),晶体病毒载体 (LV) 和整酶缺陷晶体病毒载体 (IDLV).

主要成果:

p21-mNeon绿色记者线动态跟踪TP53-p21通道的激活.
在p21表达和indel频率之间观察到强烈的相关性,验证了其在指导RNA查中的使用.
双链ODN和AAV诱导的p21激活率高于单链ODN.
与AAV相比,LV和IDLV的p21激活率较低,表明对敏感细胞的潜在安全性.
病毒促进物选择 (例如,SFFV) 显著影响p21激活水平.

结论:

该p21-mNeonGreen报告员iPSC线是评估基因编辑安全性的宝贵工具.
传递方法和矢量组件极大地影响TP53-p21通路的激活.
由于较低的p21诱导,lentiviral载体在造血细胞和免疫细胞中对基因疗法可能更安全.
在基因编辑策略中,仔细选择病毒促销者对于最大限度地减少非目标通路激活至关重要.

关键词:

克里斯普尔是什么意思?克里斯普尔是什么意思?克里斯普尔-Cas9是什么意思在P2121中,P21是指P21.光蛋白记者基因是光蛋白的记者基因.基因治疗的基因疗法这就是 iPSC 的意义.诱导多能干细胞的诱导干细胞.这是一个lentiviral向量.在 p53 里,p53 是一个 p53 的代码.再组合腺相关病毒 (rAAV)

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