通过基于CRISPR/dCas9的表观遗传修饰剂和转录激活剂,延长了初级休息T细胞的复制寿命

科学领域:

• 细胞生物学 细胞生物学
• 分子生物学分子生物学
• 表观遗传学 在表观遗传学中,表观遗传学是指表观遗传学.

背景情况:

• 细胞衰老限制了原始细胞的复制寿命.
• 端粒缩短是推动细胞衰老的关键机制.
• 重新激活端粒酶是一种延长细胞寿命的策略.

研究的目的:

• 用CRISPR/dCas9基表观遗传修饰剂在休息的T细胞中重新激活内源的TERT基因.
• 延迟细胞衰老并延长T细胞的复制寿命.
• 评估这种方法在各种细胞类型中的安全性和有效性.

主要方法:

• 使用了CRISPR/dCas9表观遗传修饰剂 (p300,TET1) 和转录激活剂 (VPH,VPR).
• 针对TERT促进器来重新连接表观遗传标记并诱导TERT表达.
• 进行了衰老测定,细胞周期分析,增殖率,生存能力和型分析.
• 通过ChIP-qPCR和蛋白质表达分析确认了TERT反应和表观遗传调制.

主要成果:

• 成功扩大休息T细胞,并延迟衰老超过三个月.
• TERT的重新激活没有影响CD3表达或诱导加速的细胞分裂.
• 在HEK293FT细胞和THP-1衍生巨细胞中证明有效.
• 在各种安全性测试中没有观察到恶性瘤转变的证据.
• 确认了TERT促进体表观遗传学和诱导端粒酶表达的特异调节.

结论:

• 基于CRISPR的表观遗传修饰是一种有效的TERT活性化和端粒维护策略.
• 这种方法成功地延迟了T细胞中的细胞衰老,没有任何不良影响.
• 该方法显示了在细胞不朽化和延迟不同细胞类型的细胞死亡方面广泛应用的潜力.