基于细胞的共价捕获deubiquitinase试验用于抑制剂发现

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 分子生物学分子生物学
• 药物发现 药物发现 药物发现

背景情况:

• 乌比基因化是一种关键的翻译后修饰,调节细胞过程.
• 脱基因酶 (DUBs) 抵消了无处不在,它们的失调与各种疾病有关.
• 针对DUB提供了治疗潜力,并有助于理解无处不在的途径.

研究的目的:

• 开发一种可靠的基于细胞的测试方法,用于对二维基基酶 (DUB) 抑制剂进行高通量查.
• 为了使在本地细胞环境中发现新型,细胞透的DUB抑制剂.
• 通过对人类进行查来验证试验的实用性USP15.

主要方法:

• 开发一种基于细胞的测定方法,使用细胞透性无素探针 (Biotin-cR10-Ub-PA) 进行共价DUB标记.
• 使用放大发光近距离同质试验 (AlphaLISA) 量化DUB活动.
• 对人类USP15与蛋白酶抑制剂库进行概念验证查.

主要成果:

• 开发的基于细胞的DUB检测方法强大,适合用于高通量查.
• 该试验成功地确定了已知的泛DUB抑制剂PR-619和其他新型DUB抑制剂对USP15.
• 证明了测试对发现各种人类DUBs的抑制剂的适应性.

结论:

• 这种新的基于细胞的DUB测定有助于发现强效和细胞透的DUB抑制剂.
• 这种测试是推动DUB向治疗和基础研究的宝贵工具.
• 该平台易于适应,用于对广泛的二维基基因酶进行查.