通过毛细血管LC/IMS/MS/MS量化宿主细胞蛋白质,结合在本地条件下在固定素柱上进行快速消化
Ryota Tomioka1,2, Kosuke Ogata1, Yasushi Ishihama1,3
1Graduate School of Pharmaceutical Sciences, Kyoto University, Kyoto 606-8501, Japan.
Mass spectrometry (Tokyo, Japan)
|September 19, 2024
概括
一种新的本地列内消化方法显著加快了生物制药的宿主细胞蛋白 (HCP) 分析. 这种增强的技术可以提高抗体药物中HCP量化的灵敏度和吞吐量.
科学领域:
- 生物制药学分析
- 分析化学 分析化学
- 蛋白质化学 蛋白质化学
背景情况:
- 宿主细胞蛋白 (HCP) 杂质是生物制药中的关键质量属性,影响安全性和有效性.
- 传统的酶相关免疫吸收试验 (ELISA) 评估了总体的HCP,而LC/MS方法确定了单个蛋白质.
- 原生消化为HCP检测提供了高灵敏度,但耗时,限制样品制备吞吐量.
研究的目的:
- 开发一种快速而灵敏的方法,用于生物制药中的宿主细胞蛋白 (HCP) 识别和量化.
- 用液体染色体质谱法 (LC/MS) 提高HP分析样本准备的吞吐量.
- 优化医疗保健人员对抗体药物的质量控制和表征的分析.
主要方法:
- 开发了一种使用素固定柱体的本地柱体消化方法.
- 评估并选择RefSeq的中国仓鼠数据库,用于从中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞中识别医疗保健人员.
- 实现高通量LC/MS/MS与单一的柱和并行反应监测-并行积累-串行碎片 (PRM-PAcSF).
主要成果:
- 减少了从一夜到10分钟的HCP消化时间.
- 从154个数量化医疗保健工作者增加到226个.
- 用合成质验证了优化的系统,证明了出色的线性,精度,准确性和低LOD/LOQ (1-3ppm).
结论:
- 优化的本地列内消化和LC/MS/MS方法使得医疗人员的高吞吐量量化成为可能.
- 与传统方法相比,这种方法显著提高了灵敏度和吞吐量.
- 该方法适用于抗体药物的质量控制和医疗保健人员的表征.
