在EF-Tu中替换Glu378会破坏KKL-55的结合

科学领域:

• 微生物学 微生物学
• 分子生物学分子生物学
• 药物发现 药物发现 药物发现

背景情况:

• 转译是一个关键的过程,也是新型抗生素开发的目标.
• 抗生素化合物KKL-55通过与延长因子EF-Tu结合来抑制转译.
• 以前的研究表明,EF-Tu中的谷氨酸378与KKL-55相互作用,但氨酸突变产生了不确定的结合数据.

研究的目的:

• 进一步调查EF-Tu残留378在KKL-55结合中的作用.
• 为了确定不同侧链在378位置对KKL-55有效性的影响.
• 为EF-Tu. 内部的KKL-55绑定口袋提供证据.

主要方法:

• EF-Tu的局部定向突变发生,在378位引入托 (E378W变种).
• 生物化学试验测量EF-Tu和KKL-55结合的平衡解离常数 (Kd).
• 在体外翻译试验,以评估E378W突变对翻译活性的影响.

主要成果:

• 在EF-Tu E378W变体中,KKL-55结合的Kd增加了超过6倍,表明了干扰.
• 在残留物378处较大的侧链会对KKL-55的结合亲和力产生负面影响.
• 该E378W变种在体外转化显著减少,没有可检测的转化转化活性.

结论:

• EF-Tu的残留物378是KKL-55绑定口袋的组成部分.
• 在EF-Tu残留378的侧链的大小对于KKL-55的疗效至关重要.
• 这些发现支持缺乏自发的KKL-55耐药突变体,并验证EF-Tu作为抗生素点.