准备代谢重编程的人类CAR T细胞并评估其体外效应的协议
Yue Hu1, Abhijit Sarkar1, Xiaotong Song1
1Department of Translational Medical Sciences, School of Medicine, Texas A&M University, Houston, TX 77030, USA; Center for Infectious and Inflammatory Diseases, Institute of Biosciences and Technology, Texas A&M University, Houston, TX 77030, USA.
STAR protocols
|September 22, 2024
概括
这项研究详细介绍了一个创建针对HER2和GPC3.3的先进CAR T细胞的协议. 这些工程细胞将免疫抑制性腺素转化为因素,在具有挑战性的瘤环境中增强T细胞存活率.
科学领域:
- 免疫学 免疫学 免疫学
- 癌症生物学 癌症生物学
- 细胞疗法细胞疗法
背景情况:
- 化学抗原受体 (CAR) T细胞疗法是一种有前途的癌症治疗方法.
- 开发和测试新型CAR-T细胞对于治疗进步至关重要.
- 瘤微环境经常表现出葡萄糖缺乏和免疫抑制.
研究的目的:
- 提出一个创建和表征代谢重编程 (MR) -CAR T细胞的协议.
- 设计针对人类表皮生长因子受体2 (HER2) 和甘氨酸-3 (GPC3) 的CAR T细胞.
- 通过调节腺代谢,提高T细胞在缺乏葡萄糖的瘤微环境中的存活率.
主要方法:
- 在CAR T细胞中过度表达腺脱氨酶1 (ADA1) 和CD26 (二二-4或DPP4).
- 用于基因传递的逆转录病毒载体的生产.
- 工程 CAR T 细胞的生成和表征.
- 检测包括ecto-ADA1活性,细胞毒性,细胞迁移和RNA测序.
主要成果:
- 该协议使HER2-和GPC3-MR-CAR T细胞的产生成为可能.
- 改造的CAR T细胞有效地将免疫抑制性腺素转化为 inosine.
- 这种代谢重编程支持T细胞在模拟的缺乏葡萄糖的瘤条件下存活.
结论:
- 本协议提供了一种方法,用于开发先进的CAR T细胞疗法.
- 通过ADA1和CD26过度表达的代谢重编程提供了一种克服瘤微环境挑战的策略.
- 这种方法有可能提高CAR T细胞治疗HER2和GPC3表达癌症的疗效.
