用Cas9增强的纳米孔测序来描述SARS-CoV-2感染的致命CAG-ACE2转基因小鼠模型

科学领域:

• * 分子生物学和遗传学
• * 病毒学和免疫学
• * 疾病研究中的动物模型.

背景情况:

• *COVID-19大流行需要强大的动物模型来治疗治疗.
• *转基因小鼠过度表达人类 ангиотензин转化酶2 (ACE2) 受体对于研究SARS-CoV-2 (导致COVID-19的病毒) 感染至关重要.
• *产生和描述这些模型的高效方法对于研究至关重要.

研究的目的:

• *为COVID-19研究生成和描述过度表达人类ACE2的转基因小鼠系.
• * 评估这些新型小鼠模型中SARS-CoV-2感染的易感性和病理结果.
• *使用先进的测序技术分析转基因整合部位和结合体结构.

主要方法:

• *将CAG-ACE2转基因构造物进行前核微注射到小鼠胚胎中.
• * 转基因小鼠和衍生细胞系的SARS-CoV-2感染.
• *对ACE2表达的分析,细胞病变效应,临床征兆和细胞病理学.
• *使用Cas9丰富的纳米孔测序用于转基因整合部位和结构分析.

主要成果:

• *成功生成了三个创始人转基因小鼠系,具有高副本数量的CAG-ACE2转基因.
• * 两种线条在暴露于SARS-CoV-2时在胚胎纤维细胞中表现出广泛的ACE2表达和严重的细胞病变效应.
• *受感染的小鼠表现出COVID-19临床症状和死亡率的快速发作,肺部病理显著.
• *纳米孔测序揭示了转基因拷贝的主要由头到尾的结合体排列,与罕见的等离子体骨干碎片.

结论:

• *开发的转基因小鼠系有效地模拟了SARS-CoV-2感染,表现出高度易感性和病理性.
• *这些模型是COVID-19治疗药物和疫苗临床前测试的宝贵工具.
• *先进的测序方法提供了对转基因整合和结构的详细见解,这对于模型表征至关重要.