一种生产非洲猪瘟病毒蛋白酶pS273R的方法
Danil S Kalinin1, Sergey G Mayorov2, Marina Yu Zemskova2
1A.N. Bach Institute of Biochemistry, Research Centre of Biotechnology of the Russian Academy of Sciences, Moscow 119071, Russian Federation.
Journal of virological methods
|September 26, 2024
概括
非洲猪瘟病毒 (ASFV) pS273R蛋白酶在大肠杆菌中使用SlyD陪伴融合产生. 这种方法产生了可溶性,活性蛋白酶和其活性的新光测定.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 病毒学 病毒学
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 非洲猪瘟病毒 (ASFV) 的pS273R蛋白酶对于病毒复制至关重要,它处理聚蛋白pp220和pp62.
- 它的重要作用使其成为抗病毒药物开发的有希望的目标.
研究的目的:
- 开发一种有效的方法,用于在大肠杆菌中产生活性ps273R蛋白酶.
- 建立一种基于光的新型试验,用于测量pS273R蛋白酶活性.
主要方法:
- 在大肠杆菌中,ps273R蛋白酶与SlyD伴侣一起表达,以确保溶解性和活性.
- SlyD融合蛋白的自催化裂变释放了活性pS273R.
- 病毒蛋白酶的染色学净化.
- 使用 thioredoxin-EGFP 基质裂解检测的光测试的开发.
主要成果:
- 在大肠杆菌中成功生成一种可溶和酶活性的ps273R蛋白酶.
- 一个简单的净化协议产生了高度净化的病毒蛋白酶.
- 开发的光方法有效地评估了ps273R活性,即使在复杂的混合物中,如细胞溶解物中,也显示了基质裂解.
结论:
- 斯莱德融合策略提供了一种强大的方法来产生活跃的ASFV pS273R蛋白酶.
- 新型光测定是一种敏感和选择性的工具,用于监测pS273R蛋白酶活性.
- 这项工作有助于进一步研究ASFV蛋白酶功能和抗病毒策略.
