建立一个以Agrobacterium tumefaciens为媒介的Hirsutella sinensis转化系统
Lijuan Wu1, Xinkun Hu2, Shen Yan3
1College of Agronomy, Sichuan Agricultural University, Chengdu 611130, China.
Current issues in molecular biology
|September 27, 2024
概括
研究人员优化了Hirsutella sinensis的Agrobacterium tumefaciens介导转化 (ATMT),使得Ophiocordyceps sinensis形成的遗传研究成为可能. 这一突破克服了了解这种复杂生物体的先前局限性.
科学领域:
- 菌类学和分子生物学 菌类学和分子生物学
- 昆虫病原菌的真菌遗传学 遗传学
背景情况:
- 奥菲奥科尔迪塞普斯辛内斯的形成涉及Hepialidae幼虫和Hirsutella sinensis之间的复杂相互作用.
- 了解O. sinensis形成的分子机制至关重要,但由于缺乏有效的H. sinensis.遗传转换协议而受到阻碍.
研究的目的:
- 为两个H. sinensis菌株开发和优化Agrobacterium tumefaciens介导的转化 (ATMT) 协议.
- 为未来对调节O. sinensis形成的基因功能研究奠定基础.
主要方法:
- 选的Agrobacterium菌株和表面活性剂 (乙酸灵,Triton X-100) 对于H. sinensis的转化效率.
- 比较了内源性与外源性促进剂在驱动基因表达中的有效性.
- 优化了关键的ATMT参数,包括化学度,细菌密度,共同培养温度和持续时间以及真菌菌株通道数.
主要成果:
- 确定了AGL1作为H. sinensis转化最有效的Agrobacterium菌株.
- 证明内源性促进体比外源性促进体表现出更强的基因表达驱动能力.
- 已建立的最佳转化条件:100μM的乙酸,50μg/mL的乙菌素B,A. tumefaciens的OD600为0.4,24小时的共同培养18°C,并使用H. sinensis在三个通道内.
结论:
- 成功建立了针对H. sinensis. 的优化ATMT协议.
- 开发的协议可以有效地对H. sinensis进行基因操纵.
- 这项研究为研究Ophiocordyceps sinensis形成的分子基础提供了必不可少的工具.
