调整VSV-G表达改善了baculovirus的完整性,稳定性和哺乳动物细胞转导效率

科学领域:

• * 分子生物学 * 分子生物学
• * 病毒学 病毒学
• * 基因治疗是一种基因疗法.

背景情况:

• *来自*Autographa californica*多重核多重体病毒 (AcMNPV) 的菌病毒载体 (BV) 对于哺乳动物细胞中的多基因传递是有效的,对于CRISPR等技术至关重要.
• * 膀性口腔炎病毒G蛋白 (VSV-G) 伪型增强BV内体逃生,通常由polH促进体驱动.
• *高VSV-G通过polH的表达导致BV的稳定性降低,形态受损,哺乳动物细胞中毒性.

研究的目的:

• * 调查替代病毒促进剂,以优化VSV-G表达水平的伪型BVs.
• * 克服与BVs中聚H驱动的VSV-G过度表达相关的缺点.
• * 评估调制VSV-G表达对BV完整性和基因传递效率的影响.

主要方法:

• * 探索了五种替代病毒促进剂来控制VSV-G在BVs中的表达.
• * 量化VSV-G表达水平与polH促进体相对.
• * 在人类细胞系中评估了BV形态,稳定性和转导效率.
• *评估了具有不同VSV-G水平的BVs的CRISPR介导基因编辑能力.

主要成果:

• *Orf-13和Orf-81促进剂降低了VSV-G表达到pOH水平的<5%.
• *这种减少挽救了BV的形态和稳定性,减轻了polH引起的问题.
• * 减少VSV-G的BV显示出高效的基因传递和CRISPR编辑,与多HVSV-G的BV相比.
• *调节的VSV-G表达改善了BV完整性和结构稳定性.

结论:

• *对于哺乳动物细胞中有效的BV转导,VSV-G过度表达是不必要的.
• *使用Orf-13和Orf-81等替代促进剂可优化VSV-G水平,提高BV性能.
• * 减少VSV-G表达提供了一种改善BV稳定性和基因编辑功效的策略.