双特异性FPF:一种用于临床前抗体开发的多功能工具

科学领域:

• 生物结合化学 生物结合化学
• 蛋白质工程是指蛋白质工程.
• 抗体模拟性发展 抗体模拟性发展

背景情况:

• 碎片-PEG-碎片 (FpF) 分子作为免疫球蛋白G (IgG) 的结合模仿剂.
• 传统的FPF使用二二硫试剂进行二硫化物重桥结合,在抗体碎片 (Fabs) 上使用可访问的二硫化物.
• 为临床前研究采购双特异性抗体可能具有挑战性,需要采用替代策略.

研究的目的:

• 为预临床开发准备双特异性FPF (bsFpF) 作为潜在的双特异性抗体模拟剂.
• 探索和改进bsFpFs的合成途径,包括顺序结合和蛋白质结合-结合方法.
• 评估bsFpFs的结合特性及其对可预测的结合配置文件的潜力.

主要方法:

• 使用二二硫试剂通过Fabs.的顺序结合合成bsFpFs.
• 对不对称的结合试剂 (bis-sulfone bis-sulfide) 的研究,以改善bsFpF合成.
• 开发一种蛋白质结合-结合方法,使用具有二硫和结合分量 (例如,TCO,Tz) 的试剂用于bsFpF制剂.
• 表面等离子体共振 (SPR) 分析以确定bsFpF及其Fab组件的结合动力学 (k_a,k_d).

主要成果:

• 双特异性FpFs (bsFpFs) 通过顺序结合和结合-结合两种策略成功合成.
• 使用不对称的试剂和结合-结合方法产生了 bsFpFs,其效率与di ((bis-sulfone) 试剂相比较.
• 与它们的PEG-Fab结合物相比,SPR研究显示在bsFpFs内Fabs的解离率 (k_d) 中存在很小的差异.
• 在bsFpF中观察到Fabs的较慢的关联率 (k_a),可能是由于影响SPR测量的质量效应.

结论:

• 开发的bsFpFs作为有效的双特异抗体模仿剂发挥作用.
• 在bsFpF中的每个Fab独立地结合其目标,表明可预测的结合行为.
• 从相应的PEG-Fab合物可可靠地估计bsFpF结合特征,从而促进临床前抗体的产生.