评估酶的协议,以优化牛脂肪组织衍生的介质干细胞隔离的效率

科学领域:

• 食品科学 食品科学 食品科学
• 生物技术是生物技术.
• 细胞生物学 细胞生物学

背景情况:

• 可持续的粮食供应是一个全球性的挑战.
• 培养肉为传统肉类生产提供了一个有希望的替代品.
• 确定最佳的细胞来源和隔离方法对于高效的培养肉的开发至关重要.

研究的目的:

• 为了比较来自脂肪组织 (AT) 的牛介质细胞 (MSC) 的各种酶分离方法.
• 确定最大限度地提高MSC产量和扩散的最佳条件,用于培养肉的应用.
• 确认孤立的牛AT-MSCs的身份和肌源性差异化潜力.

主要方法:

• 通过使用四种酶混合物 (Collagenase I型,Collagenase I型 + Trypsin,LiberaseTM,Collagenase IV型) 在不同度和化时间评估了32种隔离条件.
• 评估每个条件的细胞产量和种群翻倍时间.
• 通过三系基因分化和细胞表面标记物表达,通过三系基因分化和细胞表面标记物表达确认了MSC的身份.
• 诱导了肌源性分化,并分析了肌源性调节因子 (MRF) 基因表达和蛋白质标记物 (Desmin,Tropomyosin,Myosin重链).

主要成果:

• 使用0.1%的LiberaseTM3小时,获得了最高的细胞产量和最低的种群倍增时间.
• 孤立的细胞表现出特有的MSC标记物和三系分化潜力.
• 通过增加MRFmRNA水平和肌肉特异性蛋白质的表达来证实肌性差异化.

结论:

• 为了获得高细胞产量,建议使用0.1%的LiberaseTM3小时优化对来自牛脂肪组织的介质层细胞 (AT-MSCs) 的隔离.
• 牛AT-MSC是培养肉生产的可行的细胞来源.
• 对优化分化协议的进一步研究可以推进培养肉技术.