使用稳定同位素标记的内部标准和RP-UHPLC-MS/MS对生物矩阵中总体的量化
Eric D Queathem1,2, Alisa B Nelson1, Patrycja Puchalska3
1Division of Molecular Medicine, Department of Medicine, University of Minnesota, Minneapolis, MN, USA.
Methods in molecular biology (Clifton, N.J.)
|October 1, 2024
概括
这项研究提出了一种用于准确测量生物样本中总体 (TKBs) 的新方法. 它使用稳定的同位素标记标准和先进的质谱仪来准确量化和分化同位素.
科学领域:
- 生物化学 生化学
- 分析化学 分析化学
- 代谢学 代谢学 代谢学
背景情况:
- 体,乙乙酸盐 (AcAc) 和D-β-基酸盐 (D-βOHB) 是各种生理和病理生理条件中的关键生物标志物.
- 在生物矩阵中精确量化总体 (TKB) 对于临床和研究应用至关重要.
- 传统的TKB量化方法面临着局限性,包括狭窄的动态范围和缺乏稳定同位素标记的AcAc内部标准,以及区分D-βOHB同位素的挑战.
研究的目的:
- 开发和验证一种可靠的分析方法,用于精确量化生物样本中的TKB.
- 为AcAc合成一个稳定的同位素标记的内部标准.
- 为了能够准确地区分D-βOHB与其结构和反体异构体.
主要方法:
- 为AcAc.Ac合成和量化一个[13C]稳定同位素标记的内部标准.
- 使用商用稳定同位素 [2H] 标记的βOHB.的内部标准.
- 采用逆相超高性能液体色谱与并联质谱 (RP-UHPLC-MS/MS) 配合并行反应监测 (PRM) 进行快速和特定的TKB分析.
- 开发了一种单步衍生技术,以从L-βOHB二聚体分离出D-βOHB.
主要成果:
- 成功合成和量化了一种标记[13C]的AcAc内部标准.
- 通过使用RP-UHPLC-MS/MS实现了TKB的快速 (7分钟) 和高度精确的量化.
- 通过PRM和二聚体分离,证明了将D-βOHB从三个结构异构体和L-βOHB区分开来的能力.
- 验证了在各种生物矩阵中可靠测量TKB的方法.
结论:
- 开发的方法为TKB量化提供了严格和全面的分析管道.
- 利用稳定同位素标记的内部标准和先进的RP-UHPLC-MS/MS可以提高分析特异性和准确性.
- 这种方法克服了以前的局限性,使得在生物样本中能够精确测量D-βOHB及其同位素.
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