使用ONE-GO生物传感器检测原始细胞培养中的内源GPCR活性的协议
Remi Janicot1, Mikel Garcia-Marcos2
1Department of Biochemistry & Cell Biology, Chobanian & Avedisian School of Medicine, Boston University, Boston, MA 02118, USA.
STAR protocols
|October 2, 2024
概括
这项研究引入了ONE向量G蛋白光学 (ONE-GO) 生物传感器,用于测量初级细胞中的G蛋白结合受体 (GPCR) 活性. 这些多功能生物传感器可以检测所有四大G蛋白家族,从而实现广泛的实验应用.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 细胞生物学 细胞生物学
- 药理学 药理学是指药理学的学科.
背景情况:
- G蛋白结合受体 (GPCR) 是关键的细胞表面受体,参与许多生理过程.
- 在初级细胞中测量内源性GPCR活性存在重大实验挑战.
- 现有的方法可能缺乏检测所有主要G蛋白信号通路的多功能性.
研究的目的:
- 介绍一个详细的协议,用于利用ONE向量G蛋白光学 (ONE-GO) 生物传感器.
- 为了能够测量所有四大G蛋白家族 (Gs,Gi/o,Gq/11,G12/13) 的内源GPCR活性.
- 为研究初级细胞中的GPCR信号提供一个多功能工具.
主要方法:
- 在原始细胞中表达ONE-GO生物传感器的lentiviral转导.
- 生物发光共振能量转移 (BRET) 试验用于量化GPCR活性.
- 对BRET信号的分析,以报告内源G蛋白激活.
主要成果:
- 在初级细胞中成功表达ONE-GO生物传感器.
- 通过BRET测量对内源GPCR活性进行量化.
- 证明生物传感器能够检测通过所有四个G蛋白家族的信号传输的能力.
结论:
- 一个GO生物传感器提供了一种多功能和有效的方法,用于研究原始细胞内源性GPCR活性.
- 该协议促进了高通量查和GPCR信号传输的详细机制研究.
- 该方法增强了在生理和病理上下文GPCR功能的理解.
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