在RUBY表达植物样本中量化贝他林的简单有效方法
Dibyajyoti Pramanik1,2, Keunsub Lee1,2, Kan Wang1,2
1Department of Agronomy, Iowa State University, Ames, IA, United States.
Frontiers in plant science
|October 3, 2024
概括
一种新的方法通过测量贝他林含量来量化植物中的RUBY记者基因表达. 这种快速协议可以在没有样本牺牲的情况下,准确地对转基因组织中的基因表达进行比较分析.
科学领域:
- 植物生物技术 植物生物技术
- 分子生物学分子生物学
- 报告者基因系统
背景情况:
- 鲁比记者系统提供了植物基因表达的可见标记,产生红色色素.
- 现有的视觉标记物,如GUS和光蛋白,通常需要样本销毁或专用设备.
- 由于缺乏关于贝他林含量的强有力的定量方法,因此无法对RUBY表达的准确分析.
研究的目的:
- 开发一种简单,快速的协议来量化贝他林含量,以评估RUBY记者基因表达.
- 为了验证该协议在暂时和稳定转变的植物组织中的有效性.
- 建立一种可靠的方法,对基因表达的比较分析,由不同的调节元素驱动.
主要方法:
- 开发了一种快速从新鲜植物组织中提取贝他林的协议,使用手工磨粉机和塑料,避免液.
- 使用光谱光度和高性能液体染色学 (HPLC) 量化贝他林含量.
- 在农业透的 *Nicotiana benthamiana* 叶子和转基因玉米组织 (种子,叶子,根) 中,与RUBY表达水平相关的贝他林含量.
主要成果:
- 开发的方法提供了快速和一致的贝他林量化,通过光谱和HPLC分析进行验证.
- 在 *N. benthamiana* 叶子 (1101066 mg/kg) 和玉米组织 (15.31028.7 mg/kg) 中成功量化了差异RUBY表达.
- 贝塔林含量与RUBY表达水平有很强的相关性,这表明它适合监测转换效率.
结论:
- 本协议提供了一种简单,快速和准确的方法,用于量化各种植物组织中的RUBY记者基因表达.
- 这种方法消除了样本牺牲或专用设备的需要,简化了比较研究.
- 该协议预计将促进转基因系统中植物促进剂,增强剂和其他监管元素的研究.
