一个单步协议,用于生成不透的光HaloTag基质,用于现场活细胞应用和超分辨率成像
Kilian Roßmann1, Siqi Sun1, Christina Holmboe Olesen1
1Leibniz-Forschungsinstitut für Molekulare Pharmakologie (FMP), 13125 Berlin, Germany.
bioRxiv : the preprint server for biology
|October 10, 2024
概括
研究人员开发了一种简单的方法来创建细胞不透的HaloTag联结体 (染料-SHTLs),用于精确的表面蛋白质标记. 这种技术增强了细胞表面蛋白质的超高分辨率显微镜,这对于理解细胞通信至关重要.
科学领域:
- 细胞生物学 细胞生物学
- 生物化学 生物化学
- 显微镜的使用方法
背景情况:
- 细胞表面蛋白质调解细胞间的通信.
- 超分辨率显微镜需要对这些蛋白质进行特定的标记.
- 现有的标签方法与膜透性和染料完整性作斗争.
研究的目的:
- 开发一种方法来制造细胞无透的染料连接的HaloTag连接体 (染料-SHTLs).
- 为了实现先进显微镜的选择性表面蛋白质标记.
- 为了改善活细胞中细胞表面蛋白质的可视化.
主要方法:
- 在基因上将HaloTag蛋白 (HTP) 移植到目标蛋白中.
- 通过将硫酸盐组添加到与染料结合的HaloTag连接体中来合成细胞透性染料-SHTL.
- 在活细胞中使用广场和STED超分辨率显微镜验证染料SHTL.
主要成果:
- 染料-SHTL证明了细胞外HTP融合蛋白的独特膜染色.
- 在初级海马神经元中成功标记了神经调节G蛋白结合受体 (mGluR2).
- 在使用STED显微镜区分表面受体和细胞内受体方面取得了高精度.
结论:
- 硫酸盐修饰是一种简单而有效的策略,用于制造细胞无透染料SHTLs.
- 这种方法克服了传统标签方法的局限性.
- 染料-SHTL在活细胞成像和超分辨率显微镜中为表面特异性蛋白质可视化提供了广泛的实用性.
