开发一种多功能高通量寡核酸LC-MS方法,以加速药物发现

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 分析化学 分析化学
• 药理学 药理学是指药理学的学科.

背景情况:

• 寡核酸的量化对于生物学理解和诊断至关重要.
• 快速查和发现需要高通量方法.
• 现有的液体染色体质谱法 (LC-MS) 方法需要针对各种寡核酸进行优化.

研究的目的:

• 开发和验证一种多功能,高通量LC-MS/MS方法用于寡核酸量化.
• 优化关键测试参数,包括多重反应监测 (MRM) 过渡和内部标准.
• 为了提高精度和吞吐量,自动化样品准备.

主要方法:

• 使用液体处理工作站开发了一种自动反向液体液体提取 (LLE) 工艺.
• 采用离子配对LC-MS/MS进行MALAT-1反感性寡核酸 (ASO) 的分析.
• 利用一种通用的内部标准 (tenofovir) 来防止干扰,并将LLE与固相提取 (SPE) 进行比较.

主要成果:

• 在大鼠脑脊液 (CSF) 和血中达到2nM的下限量化值 (LLOQ).
• 证明了测定灵敏度,特异性,精度,准确性,回收,矩阵效应和稳定性.
• 成功量化MALAT-1 ASO在老鼠的CSF和注射后的血中,评估矩阵差异.

结论:

• 开发的高通量LC-MS/MS方法对寡核酸量化具有敏感性和多功能性.
• 自动化样品准备和通用的内部标准提高了测试的稳定性和吞吐量.
• 这种方法为寡核酸发现和诊断工具的开发提供了基础.