测量GPCR诱导的细胞内信号使用量化高通量测试
Shree S Kumar1, Kathleen G Mountjoy2
1Faculty of Medical and Health Sciences, Department of Molecular Medicine and Pathology, School of Medical Sciences, The University of Auckland, Auckland, New Zealand.
研究人员开发了一种新的高通量方法来测量活细胞中的细胞内. 这种定量测试在HEK293细胞中使用Fura-2/AM,使得可靠的G蛋白结合受体信号研究成为可能.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 细胞生物学 细胞生物学
- 药理学 药理学是指药理学的学科.
背景情况:
- 细胞内 (Ca2+) 信号传递对G蛋白结合受体 (GPCR) 途径至关重要.
- 由于缺乏可靠的,高通量量的定量方法,研究Ca2+信号具有挑战性.
- 现有的方法往往缺乏用于全面GPCR分析的灵敏度或吞吐量.
研究的目的:
- 开发和验证一种可靠,高通量,定量方法来测量细胞内的度.
- 为了研究表达各种GPCRs的HEK293细胞中的Ca2+信号.
- 为研究GPCR介导动态的研究人员提供详细的协议.
主要方法:
- 使用过的HEK293细胞悬浮剂装有Fura-2/AM,装在96孔板上.
- 校准的细胞内水平使用EGTA (最小值) 和离子素 (最大值).
- 使用PHERAstar FS盘子阅读器监控光,用于定量分析.
主要成果:
- 建立了一种可靠和定量方法来测量活细胞中的细胞内.
- 证明了该试验对内源和外源GPCRs (稳定或短暂表达) 的适用性.
- 提供了可适应高通量选的详细协议.
结论:
- 开发的基于Fura-2/AM的测定方法为量化细胞内提供了可靠的,高通量解决方案.
- 这种方法显著推进了研究涉及的GPCR信号通路的研究.
- 该试验适用于药物发现和涉及GPCRs的基础研究中的各种应用.
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