一个协议,以隔离和表征纯单细胞,并通过FBS涂层瓶产生单细胞衍生的树突细胞

科学领域:

• 免疫学 免疫学 免疫学
• 细胞生物学 细胞生物学
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 单细胞衍生的树突细胞 (mo-DCs) 对于免疫反应至关重要.
• 高纯度单细胞的有效隔离和优化的mo-DC生成对于免疫学研究至关重要.

研究的目的:

• 评估从外围血液单核细胞 (PBMC) 中分离纯单细胞的方法.
• 为了确定颗粒细胞-巨细胞殖民地刺激因子 (GM-CSF) 和介质蛋白-4 (IL-4) 的最佳度,用于产生mo-DCs.
• 使用流细胞计学来描述纯度和mo-DC标记物的表达.

主要方法:

• 三种单细胞分离方案的比较:用FBS涂层的3小时瓶化,用FBS涂层的夜间瓶化和磁激活细胞分类 (MACS).
• 对人类重组GM-CSF (hrGM-CSF) 和人类重组IL-4 (hrIL-4) 的五种度进行评估,用于mo-DC分化.
• 流细胞计分析以评估单细胞纯度 (CD14+) 和mo-DC标记物表达 (HLA-DR,CD80,CD83,CD86).

主要成果:

• 在FBS涂层瓶中过夜化提供了最高的单细胞纯度 (P < 0.0001),但产量较低.
• 在400U/mL的hrGM-CSF和hrIL-4的组合导致了最高的mo-DC生成率 (P<0.05).
• 这种最佳度在mo-DCs上显著增加了HLA-DR,CD80和CD86表达 (P < 0.0001),而CD83水平没有变化.

结论:

• 过夜化是一种实现高纯度单细胞的经济有效方法.
• 400 U/mL hrGM-CSF和hrIL-4是产生具有增强免疫标志物表达的mo-DCs的最佳选择.
• 这些发现为优化单细胞分离和mo-DC生成在免疫学研究中的基础.