对一种简单高产方法的新洞察力,用于生产完全折叠和功能复合的人类CCL5的简单高产方法

科学领域:

• 免疫学和分子生物学
• 蛋白质的生产和净化.

背景情况:

• 化学基因,如化学基因C-C连接体5 (CCL5),对于免疫细胞功能至关重要,指导迁移和激活.
• 在大肠杆菌中,重组CCL5的产生往往会导致不溶性纳入体,使净化复杂化,并降低活性蛋白的产量.

研究的目的:

• 开发一种高效且可扩展的方法,用于在大肠杆菌中产生生物活性CCL5.
• 为了规避与重组蛋白质生产中的纳入体形成和重新折叠相关的挑战.

主要方法:

• 从大肠杆菌SHuffle细胞中利用SUMO标记的CCL5净化,以避免二硫化键重构.
• 采用低pH透析方法进行净化,尽量减少内毒素污染.
• 通过受体酸化,内化,流和细胞迁移测试来评估CCL5的功能.

主要成果:

• 在不需要重新折叠的情况下,实现了CCL5的高产量 (约25 mg/L).
• 证明产生的CCL5是完全功能性的,通过CCR5.5诱导预期的细胞反应.
• 在纯化的CCL5.5中确认了低内毒素污染.

结论:

• 开发的方法结合了溶解度标签,SHuffle细胞和低pH透析,显著提高了活性CCL5.5的产量和纯度.
• 这种方法提供了一个强大的战略,用于生产高质量的CCL5用于各种生物应用.
• 优化的生产方法解决了利用CCL5用于研究和治疗开发的关键瓶.