在线,基因素H4 4-17异构体的自下而上表征
Cassandra N Fuller1, Kevin Jeanne Dit Fouque1, Lilian Valadares Tose1
1Department of Chemistry and Biochemistry, Florida International University, Miami, Florida 33199, United States.
这项研究使用电子解离 (ExD) 和质谱学增强了基因组蛋白形状分析. 与LC-TIMS-ExD-MS/MS相结合的可逆基结合改善了对潜在癌症生物标志物的基因组修饰的检测.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 蛋白质组学是指蛋白质组学.
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 包含翻译后修改 (PTMs) 的基因编码调节基因表达,并提供诊断生物标志物.
- 基于电子的碎片化 (ExD) 增强了序列覆盖率和PTM网站分配的可靠性,用于不稳定的修改.
- 基因组H4蛋白形,特别是具有乙化 (ac) 的蛋白形,在细胞过程和疾病中至关重要.
研究的目的:
- 评估基因导化方法 (propionylation,citraconylation) 用于基因素H4 4-17蛋白质形式的自下而上分析.
- 评估两个平台 (定制布鲁克,商业SCIEX) 集成液态染色学 (LC),被困离子移动性谱学 (TIMS) 和ExD质谱学 (MS/MS) 的性能.
- 使用这些方法研究H4 4-17蛋白形定位异构体的分辨率.
主要方法:
- 使用在线LC-TIMS-ExD-MS/MS进行的基因组H4 4-17的自下而上的蛋白形分析.
- 无可逆转化和可逆转化衍生物化技术的比较.
- 使用一个定制的LC-TIMS-q-ExD-ToFMS/MS (Bruker Impact) 和一个商业的μLC-EAD-ToFMS/MS (SCIEX) 仪器.
- 从模型癌细胞 (HeLa + HDACi) 中分析了组 histone H4 4-17 蛋白质形式.
主要成果:
- 在线LC-ExD-MS/MS在两个平台上实现了所有H4 4-17 (0-4ac) 蛋白质形式的90%以上的序列覆盖率.
- LC-TIMS成功地解决了内源的H4 4-17定位异构体标准,但propionylated异构体没有完全解决.
- 结合LC-TIMS-q-ExD-ToFMS/MS的cyraconylation可检测更多的H4 4-17蛋白形在HeLa+HDACi细胞中,由于异构体分离的改善.
结论:
- 可逆基结合LC-TIMS-ExD-MS/MS提供了优越的分辨率和检测素H4 4-17蛋白形位置异构体.
- 这种方法增强了对基因修饰的特征,这对于理解基因调节和识别癌症生物标志物至关重要.
- 这些发现支持ExD和TIMS在复杂的生物样本中进行详细的蛋白形状分析的实用性.
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