在哺乳动物细胞中基于CRISPR的内源蛋白标记的协议
Yu-Xi Xiao1, Jiarun Wei1, Jason Moffat2
1Program in Genetics and Genome Biology, The Hospital for Sick Children, Toronto, ON, Canada; Department of Molecular Genetics, University of Toronto, Toronto, ON, Canada.
STAR protocols
|October 20, 2024
概括
这项研究引入了一种基于CRISPR的方法,用于哺乳动物细胞内源性蛋白质标记,使研究人员能够跟踪蛋白质定位和相互作用. 该协议详细标记了特定的人类蛋白质,为功能研究提供了灵活的方法.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 遗传学 遗传学 是一个
- 细胞生物学 细胞生物学
背景情况:
- 了解蛋白质功能需要跟踪蛋白质的定位和细胞内的相互作用.
- 内源性蛋白质标记是研究原生蛋白质行为的一种强大技术.
研究的目的:
- 提出基于CRISPR的哺乳动物细胞内源性蛋白质标记的详细协议.
- 为功能性蛋白质组研究提供灵活和广泛适用的方法.
主要方法:
- 克里斯普尔-Cas9和Cas12a指导设计用于基因敲击.
- 模块化维修模板设计和克隆.
- 脂质转染和电穿孔,用于输送CRISPR组件.
- 对等离子体和核蛋白复合体 (RNP) 格式的适应性.
主要成果:
- 成功地对人类TSC22D2和MAP4蛋白进行内源标记.
- 一个基于CRISPR的多功能内分标签协议的演示.
- 该协议容纳了各种Cas核酶传递方法.
结论:
- 开发的基于CRISPR的内分标签协议为研究内源蛋白质提供了灵活性和广泛适用性.
- 这种方法促进了蛋白质局部化和近位相互作用的研究.
- 该协议为分子和细胞生物学研究人员提供了宝贵的资源.


