DMF-Bimol:用数字微流体计数单细胞中的mRNA和蛋白质分子
Shanshan Liang1, Chong Li1, Yu Ning1
1Collaborative Innovation Center of Chemistry for Energy Materials, the MOE Key Laboratory of Spectrochemical Analysis and Instrumentation, State Key Laboratory of Physical Chemistry of Solid Surfaces, Department of Hematology, The First Affiliated Hospital of Xiamen University and Institute of Hematology, School of Medicine, Xiamen University, Xiamen 361005, China.
Analytical chemistry
|October 21, 2024
概括
数字微流体自动化单细胞蛋白和mRNA计数使用DMF-Bimol. 这种方法显著提高了灵敏度,揭示了异质细胞群体中复杂的基因表达动态.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 分子生物学分子生物学
- 细胞生物学 细胞生物学
背景情况:
- 目前用于联合mRNA和蛋白质分析的方法缺乏灵敏度,容易出现错误.
- 分析单细胞异质性对于理解细胞功能至关重要.
研究的目的:
- 开发一个自动化的数字微流体平台,用于同时单细胞mRNA和蛋白质的量化.
- 提高近距离结合试验 (PLA) 和滴滴数字PCR (ddPCR) 的灵敏度和效率.
主要方法:
- 利用可定位的数字微流体 (DMF) 与水友性-疏水性接口进行单细胞隔离.
- 整合近距离结合试验 (PLA) 和一阶段RT-droplet数字PCR (RT-ddPCR) 进行同时检测.
- 使用封闭的滴滴反应系统来提高蛋白质度并减少污染.
主要成果:
- DMF-Bimol实现了3313个蛋白质副本的检测极限,比传统的PLA提高了17倍的灵敏度.
- 与散装分析相比,单个细胞中mRNA和蛋白质水平之间的相关性较低 (斯皮尔曼r = 0.255).
- 在稳定的CD147mRNA水平的髓瘤细胞中观察到CD147蛋白的增加,这表明转化调节.
结论:
- DMF-Bimol提供了一种高度灵敏和自动化的解决方案,用于单细胞多组体分析.
- 该平台可以揭示细胞异质性的复杂的转录后调节机制.
- 通过揭示瘤原性激活通路,证明了促进癌症研究的潜力.


