在人类肝脏中检测和量化药物蛋白君子

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 药理学 药理学是指药理学的学科.
• 分析化学 分析化学

背景情况:

• 来自反应性代谢物的共价药物蛋白添加物与不良药物反应和细胞染色体P450 (CYP) 酶失活有关.
• 目前的方法很难在复杂的生物样本中识别和量化这些 adducts,从而限制了机理学理解.

研究的目的:

• 开发和验证一个敏感的工作流程,用于检测低丰度的共价药物-蛋白质添加物.
• 用拉洛西芬作为模型化合物来描述由CYP酶介导的添加物形成.
• 区分潜在的有害和良性药物蛋白质添加物.

主要方法:

• 结合数据依赖和数据独立获取 (DDA和DIA) 液态染色学与双重质谱学 (LC-MS/MS).
• 用拉洛西芬化人类肝脏显微体 (HLMs),以产生药物蛋白添加物.
• 使用复合CYP3A和CYP2C酶确认了添加物形成.

主要成果:

• 在78种蛋白质中检测到共价添加物,包括HLM中的关键CYP酶 (CYP3A,CYP2C).
• 在经过测试的CYP中确认了 adduct 形成,即使是那些没有被raloxifene 抑制的,这表明一些 adduct 可能是良性的.
• DIA 分析显示,在不同的人类肝脏中,可变的添加物丰富,而不会影响未添加的水平.

结论:

• 本文所介绍的LC-MS/MS工作流程为复杂的生物矩阵中敏感的 adduct 检测建立了一个新的标准.
• 这些发现提供了对人类 adductome 的见解,以及良性 adduct 形成的可能性.
• 这种方法将推动机理学研究,以区分引起药物不良反应的诱导物和不引起药物不良反应的诱导物.