针对人类阿波利波蛋白B-100产生的新型单克隆抗体的CDR识别,表位图和结合亲和度的确定
Tariga Sritrakarn1, Kanokwan Lowhalidanon2, Panida Khunkaewla1
1Biochemistry-Electrochemistry Research Unit, School of Chemistry, Institute of Science, Suranaree University of Technology, Nakhon Ratchasima 30000, Thailand.
Biochimica et biophysica acta. Proteins and proteomics
|October 25, 2024
概括
这项研究描述了针对阿波利波蛋白B-100 (apoB-100) 的三个单克隆抗体 (mAbs),详细说明了它们的结合部位和亲缘关系. 这些发现有助于选择适合实验室和临床研究的抗体.
科学领域:
- 免疫学 免疫学 免疫学
- 生物化学 生化学
- 结构生物学 结构生物学
背景情况:
- 脂蛋白B-100 (apoB-100) 是LDL胆固醇的关键组成部分,针对它的单克隆抗体 (mAbs) 对研究至关重要.
- 鉴定apob-100的mAbs,包括它们的结合表位和亲和关系,对于它们在诊断和治疗中的有效应用至关重要.
研究的目的:
- 为了全面描述三个内部生成的mAbs (hLDL-E8,hLDL-2D8,hLDL-F5) 针对阿波利波蛋白B-100 (apoB-100).
- 确定这些mAbs的互补性决定区域 (CDR),结合性表位和结合性亲和力.
- 为选择适合实验室和临床研究的mAbs提供数据.
主要方法:
- 用RT-PCR和DNA测序来分析mAbs.的可变基因和CDR序列.
- 使用 SWISS-MODEL 来构建 mAb 变量碎片 (Fv) 的 3D 结构,并通过 Ramachandran 图表确认了准确性.
- 血栓解裂,西斑和抑制ELISA被用于识别apoB-100碎片 (T3和T4) 上的结合表位.
- 进行间接ELISA以确定每个mAb的结合亲和力 (Kaff).
主要成果:
- 所有mAbs都拥有kappa轻链和gamma重链,CDR序列与数据库共享超过50%的身份.
- hLDL-E8和hLDL-F5与apoB-100的T3片段 (aa 1297-3249) 结合,而hLDL-2D8与T4片段 (aa 1-1297) 结合.
- hLDL-E8与hLDL-2D8的不同表位结合,与hLDL-F5.5有一些重叠.
- 结合亲和度 (Kaff) 确定为:hLDL-2D8 (1.51 × 10^9 M-1),hLDL-E8 (7.25 × 10^8 M-1),和hLDL-F5 (4.39 × 10^6 M-1).它们的结合亲和度为:hLDL-2D8 (1.51 × 10^9 M-1),hLDL-E8 (7.25 × 10^8 M-1),和hLDL-F5 (4.39 × 10^6 M-1).它们的结合亲和度为:
- hLDL-2D8和hLDL-E8识别单个表位,而hLDL-F5可能识别多个表位或具有较低的亲和力.
结论:
- 该研究成功地对apoB-100进行了三种新型mAbs的特征鉴定,阐明了它们的特定结合特性.
- 对于hLDL-E8,hLDL-2D8和hLDL-F5的独特表位结合和亲和概况,为它们的应用提供了有价值的信息.
- 这些特征的mAbs为推进有关apoB-100和心血管疾病的领域的研究提供了有前途的工具.
