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Updated: Jun 9, 2025
06:52
Kinetic Screening of Nuclease Activity using Nucleic Acid Probes
Published on: November 1, 2019
8.2K
基于活动的DNA编码图书馆选真核转化选择性抑制剂
Huda Barhoosh1, Anjali Dixit1, Wesley G Cochrane1
1Department of Pharmaceutical Sciences, University of California, Irvine, California 92697, United States.
ACS central science
|October 28, 2024
概括
研究人员开发了一种使用体外转录-翻译 (IVTT) 和DNA编码图书馆 (DEL) 的新方法,以发现小分子探针,用于以前无法使用的蛋白质. 这个平台可以在人类蛋白质组中进行可扩展的探头发现.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分子生物学分子生物学
- 药物发现 药物发现 药物发现
背景情况:
- 大多数人体蛋白质缺乏可用药物的结合口袋,将小分子探针的发展限制在蛋白质组的2%左右.
- 对于许多蛋白质标,传统的高通量选试验往往是不可行的.
研究的目的:
- 开发一种通用选试验,用于发现针对具有挑战性或未知功能的蛋白质的小分子探针.
- 为了规避法定药物适用性和测试开发的局限性.
主要方法:
- 通过将记者基因 (例如GFP) 融合到目标序列,开发了一种体外转录-翻译 (IVTT) 活性试验.
- 通过使用微流体 picoliter 尺度滴滴,选了 5,348 个成员的 DNA 编码库 (DEL) 寻找翻译抑制剂.
- 使用PCSK9-GFP报告员验证的命中,包括细胞分析和初步选择性分析.
主要成果:
- 确定了PCSK9-GFP IVTT的多个抑制剂,其化合物降低了HepG2细胞中的PCSK9水平.
- 通过选DEL与RPL27,KRASG12D,MST1和USO1.1等多种目标来证明一种插入和使用的方法.
- 在1-20μM之间实现了IC50值,用于验证的命中.
结论:
- 微流体IVTT DEL选平台提供了一个可扩展的解决方案,用于对更广泛的蛋白质标进行探针发现.
- 这种方法显著扩大了识别人类蛋白质组及其以外的化学探针的潜力.
- 选择性翻译调制为克服传统药物发现约束提供了一个可行的策略.
