通过数字滴滴聚合酶连锁反应对净化载体样本中的腺相关病毒基因组进行量化
Nathalie Van den Berghe1, Elien Costermans1, Samir Nuseibeh1
1Trellis Research Group, Department of Cellular and Molecular Medicine, Department of Microbiology, Immunology and Transplantation, KU Leuven.
Journal of visualized experiments : JoVE
|October 28, 2024
概括
一个新的数字滴滴PCR (dd_PCR) 协议准确量化了腺相关病毒 (AAV) 基因组副本. 这种可靠的方法对于优化AAV基因疗法生产和临床应用至关重要.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 分子生物学分子生物学
- 基因治疗 基因治疗
背景情况:
- 基因相关病毒 (AAV) 是基因疗法的关键非致病载体.
- 精确量化AAV基因组拷贝数对于生物过程优化和剂量计算至关重要.
- 目前还缺少用于AAV病毒基因组定位的标准化协议.
研究的目的:
- 呈现一个数字滴滴PCR (dd_PCR) 协议,用于精确量化净化AAV载体样本中的病毒基因组.
- 建立一种可靠的AAV基因组定位方法,以支持基于AAV的基因疗法开发.
主要方法:
- 样品经过DNase I处理以去除污染的DNA.
- 使用dd_PCR用特定的原始探针集和PCR试剂量化AAV基因组.
- 病毒基因组标位是根据滴滴度 (拷贝/μL) 计算的,并考虑稀释.
主要成果:
- 成功的dd_PCR测量显示出清晰的滴滴分离,接受的滴滴>10,000,标位在10-10,000副本/μL之间.
- 重复测量显示变化系数 (CV) 低于20%.
结论:
- 提出的dd_PCR协议为AAV基因组定位提供了一种可靠的方法.
- 这种标准化的方法将有助于开发安全有效的基于AAV的基因疗法.
更多相关视频
07:43Author Spotlight: Addressing Regulatory Gaps in Molecular Studies by Quantifying Viral Vectors in Complex Matrices
Published on: July 14, 2023
1.8K
04:43Author Spotlight: Optimizing Digital Droplet PCR Method for Accurate Adeno-Associated Viral Genome Quantification
Published on: October 11, 2024
1.8K
