为细胞外囊泡隔离设置成功的分类
Monica Romanò1, Daniela Boselli2, Enrico Ragni3
1FRACTAL - Flow cytometry Resource, Advanced Cytometry Technical Applications Laboratory, IRCCS Ospedale San Raffaele.
Journal of visualized experiments : JoVE
|October 28, 2024
概括
研究人员开发了一种方法,从脂肪衍生的干细胞 (ASC) 中净化细胞外囊泡 (EVs),用于治疗. 该协议确保了高纯度的电动汽车,这对于再生医学应用至关重要.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 再生医学是一种再生医学.
- 细胞生物学 细胞生物学
背景情况:
- 介酶体 stromal 细胞 (MSCs) 释放富含治疗性microRNA的细胞外囊泡 (EVs).
- 纯化MSC-EV显示出作为下一代治疗各种疾病的新一代治疗方法的希望.
- 脂肪酸衍生的MSCs (ASCs) 经常用于再生医学,特别是骨科.
研究的目的:
- 建立一个强大的协议来从脂肪衍生的MSC (ASC) 进行纯细胞外囊泡 (EV) 的分类.
- 优化排序参数,以实现高效准确的电动汽车隔离.
- 为了确保治疗应用的排序EV的纯度和特征.
主要方法:
- 用碳氧化素胺基乙醇 (CFSE) 进行EV隔离和标记.
- 基于流细胞计的ASC-EV的分类,使用优化的喷嘴尺寸,频率和外套压力.
- 通过使用分类器和纳米粒子跟踪分析 (NTA) 进行重新分析来评估纯度,以确定尺寸分布.
主要成果:
- 通过使用精细的分类策略,成功地隔离和净化ASC-EV.
- 根据MISEV 2023和MIFlowCyt EV指导方针进行优化分类条件的演示.
- 在分类后验证EV纯度和尺寸分布.
结论:
- 开发的协议为获得纯ASC-EV种群提供了一种可靠的方法.
- 高纯度的EV对于准确的表征和治疗开发至关重要.
- 该战略提升了EV在再生医学和治疗应用中的潜力.
