制定和验证全球抗微生物耐药性废水监测数字滴滴PCR方法的战略

科学领域:

• 环境微生物学与公共卫生
• 分子诊断和传染病监测分子诊断和传染病监测
• 基于废水的流行病学.

背景情况:

• 抗菌素耐药性 (AMR) 是全球主要的健康威胁,需要准确和实时监测.
• 废水监测提供了一种具有成本效益的方法,可以在区域范围内跟踪AMR概况.
• 现有的基于PCR的废水中AMR监测方法缺乏根据国际标准的验证.

研究的目的:

• 提出和验证一个工作流程,以开发和协调基于PCR的方法,用于废水中全球AMR监测.
• 开发和验证用于检测关键抗微生物耐药性基因 (ARG) 的数字滴滴PCR (ddPCR) 方法.

主要方法:

• 开发基于PCR的方法开发和验证的工作流程,包括数据库构建和微生物收集.
• 创建和验证四个双重ddPCR测定,针对七个ARG (blaCTX-M,blaKPC-2/3,tet(M),erm(B),vanA,sul2,aac(3) -IV) 和I类整体 (intl1).
• 基于国际标准标准的性能评估,包括特异性,敏感性 (检测限度) 和对废水样本的应用.

主要成果:

• 成功开发和验证了四种双重ddPCR方法,符合国际性能标准.
• 方法显示高特异性 (没有假阳性/假阴性) 和灵敏性 (检测极限<25个副本).
• 使用来自比利时两个设施的14个废水样本确认了适用性.

结论:

• 拟议的工作流允许开发和验证基于PCR的协调方法,用于废水中全球AMR监测.
• 经过验证的ddPCR方法为监测环境样本中的关键ARG和移动耐药性基因提供了一个敏感和特定的工具.
• 这项研究代表了在废水中进行标准化和全球适用的AMR监测方面迈出的重要一步.