开发一种新的无标签子单位HILIC-MS方法,用于在治疗性单克隆抗体中进行域特定的自由醇识别和定量

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 分析化学 分析化学
• 制药科学 制药科学

背景情况:

• 单克隆抗体 (mAbs) 中的二硫化键对于结构完整性和功能至关重要.
• 在mAbs中的自由硫醇可能来自不完全的二硫化物键形成,影响稳定性和有效性.
• 目前的自由硫醇量化方法 (以标签为基础) 在速度,准确性和对文物潜在的限制.

研究的目的:

• 开发一种新的,无标签的方法,以精确地在mAbs.中定量自由硫醇.
• 为了使域特定的局部化和内链自由醇的量化.
• 为 mAb 开发能力评估提供高通量,简化替代现有方法.

主要方法:

• 开发了一种无标签的水友交互液体染色学-质谱法 (HILIC-MS) 方法.
• 该方法在子单位层面上分离自由的醇物种.
• 通过MS2碎片化模式来实现自由醇的局部化.

主要成果:

• 通过HILIC-MS方法,可以在特定域的分辨率下轻松识别和定量链内自由硫醇.
• 与自下而上的方法相比,这种子单位级别的分析提供了更高的吞吐量和更简单的样本准备.
• 该方法使链特异性自由硫醇分析成为可能,对于双特异性mAbs.特别有用.

结论:

• 开发的无标签HILIC-MS方法是一种强大的工具,用于在早期开发性评估期间选mAb候选物与自由硫醇.
• 它在整个过程开发过程中促进了mAb样本的有效可比性评估.
• 这种方法提高了治疗抗体的质量控制和开发.