检测和优化微生物表达系统,用于细胞外生产和净化Ca2+响应的相变附录素融合
Jinjing Li1, Baokang Wu1, Yiting Ji1
1School of Life Science, Anhui Agricultural University, Hefei, Anhui, 230036, PR China.
Protein expression and purification
|November 1, 2024
概括
人类附录A1促进了无列蛋白质的净化. 这项研究优化了大肠杆菌中附录A1标记蛋白的细胞外生产,使用一种新的双标记系统实现了高纯度和回收,以实现经济高效的净化.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 蛋白质工程是指蛋白质工程.
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 人类附录A1 (ANXA1) 之前被确定为一种多功能净化标签.
- ANXA1 通过对有反应的沉来实现无柱净化.
- 微生物系统中的细胞外蛋白质生产对于高效的净化至关重要.
研究的目的:
- 在微生物宿主中研究ANXA1标记的绿色光蛋白 (GFP) 的细胞外生产.
- 在大肠杆菌中优化高产量的细胞外表达和净化条件.
- 为增强蛋白质净化和回收开发一种新的协同标签系统.
主要方法:
- 设计了ANXA1-GFP融合结构,用于大肠杆菌,细菌细菌和牧羊的细胞外表达.
- 在大肠杆菌中优化共表达酶,培养基和诱导参数.
- 使用脂酶C,Triton X-100,沉,EDTA再溶解和结合用于净化.
- 使用在树脂上的切割与特定的蛋白酶用于无标签的蛋白质回收.
主要成果:
- 无领导的ANXA1-GFP融合蛋白在大肠杆菌中成功地通过Triton X-100等添加剂在细胞外分泌.
- 优化的大肠杆菌表达产生了高水平的ANXA1-GFP和共同表达的5-aminolevulinate脱水酶.
- 通过沉和EDTA再溶解,达到可接受的蛋白质纯度和恢复.
- 配对标签系统,包括结合,使得相继的亲和度沉和净化.
- 与自由融合蛋白质裂变相比,在树脂上的裂变导致释放的无标签蛋白质的纯度更高.
结论:
- 大肠杆菌中ANXA1标记蛋白的细胞外生产是可行的,可以优化.
- 开发的并联标签系统提供了一种具有成本效益和高效的两步净化方法.
- 这种方法允许高纯度的无标签蛋白回收,适用于各种融合蛋白.
