一个TRIM21过度表达的鼠标线路的生成和描述

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 遗传学 是一个遗传学.
• 细胞生物学 细胞生物学

背景情况:

• 了解蛋白质功能需要特定的蛋白质去除.
• 切除系统使用TRIM21 (TRIM原子,RING指,3和HECT域和RLD蛋白21),一种抗体受体和全方位酶,用于快速降解蛋白质.
• 内源TRIM21表达仅限于特定的细胞类型,限制了Trim-Away系统的应用.

研究的目的:

• 为了生成TRIM21过度表达的条件鼠标模型.
• 为了实现细胞特异性TRIM21表达,以实现向蛋白质的减少.
• 为了验证Trim-Away方法在不同组织和细胞类型中的有效性.

主要方法:

• 使用CRISPR技术将一个有条件的TRIM21过度表达磁带插入Rosa26安全港站点.
• 生成的小鼠与Cre-driver线 (Zp3^Cre用于卵细胞,Hprt^Cre用于全球表达) 进行了繁殖,以实现细胞特异的TRIM21过度表达.
• 通过微注射抗体对IP₃受体或SNAP23在卵细胞中的抗体和神经细胞中的电孔抗体来测试Trim-Away系统的有效性.

主要成果:

• TRIM21蛋白在使用Zp3^Cre小鼠的卵细胞中特别过度表达,并在使用Hprt^Cre小鼠的全球范围内过度表达.
• 将特定抗体微注射到TRIM21过度表达卵细胞中,导致IP₃受体和SNAP23.3的有效降解.
• 来自全球过度表达TRIM21小鼠的皮质神经细胞在抗体电穿孔后迅速减少了IP₃受体蛋白.

结论:

• 开发的有条件的TRIM21过度表达的小鼠线有效地使Trim-Away系统能够针对性地减少蛋白质.
• 这种方法允许在广泛的细胞类型和组织中对蛋白质进行急性和特异性降解.
• 这些小鼠对研究界来说是一个有价值的工具,可以通过有针对性的降解来研究蛋白质的功能.