高灵敏的一同热试验,结合滚动圆放大和CRISPR/Cas12a对阿弗拉托克素B₁的检测

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 分子生物学分子生物学
• 分析化学 分析化学

背景情况:

• 谷物中毒素污染是一个全球性问题,对健康构成重大风险.
• 当前的检测方法往往缺乏现实世界样品所需的效率和灵敏度.

研究的目的:

• 开发一种新的,超灵敏的,可访问的测定方法来检测亚毒素B1 (AFB1).
• 将滚动循环放大 (RCA) 与CRISPR/Cas12a技术集成在一起,以增强菌毒素检测.

主要方法:

• 设计了一种单异热试验,利用磁珠与AFB1的aptamers功能化.
• 特定的AFB1识别触发cDNA释放,激活RCA进行指数级放大.
• 通过DNA记者切割,利用CRISPR/Cas12a的附带活动进行信号放大.

主要成果:

• 该试验实现了超敏感检测,极限低至0.016 ng/mL (光) 和0.408 ng/mL (视觉).
• 在真实样本中成功应用显示了高回收率 (90-114%).
• 该试验既提供了定量光检测,也通过侧流带进行视觉检测.

结论:

• 集成的RCA和CRISPR/Cas12a试验为毒素检测提供了一个强大而通用的平台.
• 这种方法提高了真菌毒素分析的可访问性,特别是在资源有限的地区.
• 开发的测定方法可确保在各种应用中可靠和超灵敏地检测AFB1.