开发成像毛细管异电聚焦作为一个平台的错配副产品测试方法,用于不对称的基于WuXiBody的双特异抗体

科学领域:

• 生物制药学分析分析
• 蛋白质化学 蛋白质化学
• 分析化学是一种分析化学.

背景情况:

• 通过Knobs-into-Holes (KiH) 技术产生的双特异性抗体 (BsAbs) 可以形成同分体副产品 (KK和HH).
• 由于类似的分子大小,这些副产品很难用SEC-HPLC等常规方法从目标BsAb中分离出来.
• 不对称的基于WuXiBody的双特异性抗体 (AsWXbsAbs) 具有独特的PI差异,可用于分离.

研究的目的:

• 应用成像毛细管异电聚焦 (icIEF) 来区分和量化AsWXbsAbs中的错配副产品.
• 为了利用来自CH1/CL域替换与TCR常数域的增强分离而产生的piI差异.
• 为了验证icIEF作为一个强大的分析方法在过程中控制和释放测试AsWXbsAbs.

主要方法:

• 构建和表达AsWXbsAbs的重链和轻链变体.
• 使用成像毛细管异电聚焦 (icIEF) 基于异电点 (pI) 差异来分离同位素.
• 方法资格包括K相关和H相关物种的特异性,线性和定量限制.

主要成果:

• 表达变异的实验PI值证实了理论预测,验证了icIEF的歧视力.
• 实现了在工艺中的K相关和H相关物种的丰富,使得方法开发成为可能.
• 该ICIEF方法表现出良好的特异性和线性,K相关物种的量化极限为4% (R2=0.9919),H相关物种的量化极限为1% (R2=0.9805).

结论:

• icIEF是一种能够从目标AsWXbsAbs中区分KK和HH同位体的技术.
• 开发的icIEF方法适用于工艺测试和释放试验.
• 该方法为多个AsWXbsAbs项目的质量控制提供了一个简单,快速和有效的解决方案.