有效的活跃lysyl内酶的周等离子体表达和优化净化方法

科学领域:

• 生物技术是生物技术.
• 蛋白质表达方式
• 酶学 是一种酶学.

背景情况:

• 由于其复杂的结构,重新组合生产基内酶 (Lys-C) 是具有挑战性的.
• Lys-C 是蛋白质组学中对于蛋白质消化的关键酶.

研究的目的:

• 为了优化E. coli中Lys-C的周等离子体表达.
• 为了确定影响活性lys-C酶恢复的因素.

主要方法:

• 编优化的Lys-C基因被克隆到pET26b (+) 中,用于E. coli Rosetta (DE3) 中的周等离子体表达.
• 研究的IPTG度,细胞密度,还原剂 (谷氨,氨酸,二甲乙醇) 和收获时间.
• 使用 DEAE 和 Ni-NTA 染色学净化 Lys-C.

主要成果:

• 在0.05毫米IPTG (5.49%) 的最高表达.
• 最佳条件 (8毫米囊,在OD600的诱导:0.45,6小时化) 的活性增加了23.5%,13.3%和76.4%.
• 介质和缓冲剂中的降解剂显著增强了lys-C活性 (高达81.6%),并改善了折叠.

结论:

• 优化的周等离子体表达和净化显著增加了lys-C活性.
• 减少剂对于适当的lys-C折叠和增强酶功能至关重要.
• 这项研究提供了一种可靠的方法,用于生产蛋白质组分的活性重组lys-C.