基于高密度Sf9细胞培养的复合腺相关病毒 (rAAV) 生产的试点规模工艺开发
Xinran Li1,2, Jieyi Gu2, Haoquan Wu3
1College of Pharmaceutical Science, Zhejiang University of Technology, Hangzhou, 310000, China.
Virology journal
|November 8, 2024
概括
用于基因治疗的复合腺相关病毒 (rAAV) 载体的工业规模生产在Sf9细胞中使用baculovirus表达载体系统 (BEVS) 得到了推进. 这种优化的料批次工艺实现了高细胞密度和rAAV标题,成功扩展到试点生产.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 细胞生物学 细胞生物学
- 基因治疗 矢量生产 基因治疗
背景情况:
- 基因治疗药物需要工业规模的生产,重组腺相关病毒 (rAAV) 是关键载体.
- 使用Sf9细胞的baculovirus表达载体系统 (BEVS) 是生产rAAV的常见方法.
- 扩大rAAV生产规模对于满足市场需求至关重要.
研究的目的:
- 开发和优化Sf9细胞食批量工艺,用于使用BEVS.大规模生产rAAV.
- 为了应对高密度细胞培养和扩大规模期间空气泡形成的挑战.
- 建立一个强大的和可扩展的生产rAAV矢量过程.
主要方法:
- 开发了一种Sf9细胞养批量工艺,最初在摇瓶中.
- 在实验室规模的生物反应器中利用直角实验来确定关键的过程因素.
- 建立了基于平等P/V原则的试点规模生物反应器过程,减轻了气泡问题.
主要成果:
- 细胞密度达到22.8×10^6细胞/毫升,rAAV titre达到20×10^11载体基因组/毫升.
- 成功地将优化料批量工艺扩展到50升试点规模生物反应器.
- 克服了与高密度细胞培养和气泡形成相关的挑战.
结论:
- 开发的过程为进一步扩大rAAV生产提供了技术基础.
- 通过成功的试点规模实施,确保基因疗法载体的产品能力.
- 为基于细胞培养的药物制造工艺提供了有价值的参考数据.
