没有二进制的梯度-化纳米流液体染色学:光滑的梯度使单细胞蛋白质学可重复,灵敏和低成本的分离成为可能

科学领域:

• 分析化学 分析化学
• 生物化学 生物化学
• 蛋白质组学是指蛋白质组学.

背景情况:

• 低流速液体色谱 (LC) 对于基于质谱的蛋白质组分析微量分析物 (包括单细胞) 的概况至关重要.
• 现有的方法需要昂贵的高压二进制,并可能因梯度分裂而遭受流量不一致.
• 对于低流量LC-MS,需要具有成本效益和可靠的梯度生成方法.

研究的目的:

• 开发一种新的,具有成本效益的方法,以在低流速下产生光滑液体色谱梯度.
• 通过质谱测量来证明这种方法对使用质谱的敏感蛋白质组分析的应用.
• 研究单细胞中的差异性蛋白质表达和免疫反应.

主要方法:

• 开发了一种使用开放毛细血管中的泰勒分散来结合移动相段的新渐变化技术.
• 这种方法利用单一的同位素高压,消除了对二进制和流量分割的需求.
• 使用timsTOF质谱仪对HeLa细胞消化和单细胞蛋白质组进行LC-MS/MS分析.

主要成果:

• 基于泰勒分散的方法成功生成了光滑的10分钟和20分钟的活性梯度.
• 数千种蛋白质的精确量化是通过200 pg注射HeLa消化剂来实现的.
• 在两个ATG-KOHeLa细胞群之间发现了蛋白质表达的显著差异,揭示了差异性病毒DNA免疫反应的潜在机制.

结论:

• 开发的泰勒分散梯度方法为低流量LC-MS提供了具有成本效益和强大的替代方案.
• 这种技术使微量分析物和单细胞的敏感和可重复的蛋白质组概况成为可能.
• 这项研究提供了关于细胞异质性和蛋白质层面的免疫反应机制的见解.