一个改进的聚焦形成试验,用于确定登革热病毒的滴度
Maharah Binte Abdul Mahid1, Pradeep Bist1, Kristmundur Sigmundsson2
1Programme in Emerging Infectious Diseases, Duke-National University of Singapore Medical School, Singapore, Singapore.
Bio-protocol
|November 14, 2024
概括
这项研究引入了一种改进的聚焦形成试验 (FFA) 用于量化登革热病毒 (DENV) 血清型. BHK-21细胞和自动成像提高了DENV检测和抗病毒查效率.
科学领域:
- 病毒学 病毒学
- 传染性疾病 传染性疾病
- 药物发现 药物发现 药物发现
背景情况:
- 登革热病毒 (DENV) 是一种由蚊子传播的病毒,具有四种血清型 (DENV-1-4),构成严重的全球健康威胁.
- 准确的 in vitro 病毒量化方法,如斑块测试和焦点形成测试 (FFA) 对于抗病毒治疗的发展至关重要.
- 使用Vero细胞的传统方法在检测某些DENV分离物方面存在局限性,需要改进量化技术.
研究的目的:
- 开发一种更灵敏,更有效的体外试验法,用于量化所有四种DENV血清型.
- 建立针对DENV.抗病毒药物查的强有力的协议.
- 为了比较改进的FFA与传统的斑块测试的疗效.
主要方法:
- 使用BHK-21细胞,在DENV斑块和焦点检测方面表现出比Vero细胞更高的敏感性.
- 开发了一种改进的FFA协议,包含泛病毒包裹 (E) 抗体,以最大限度地减少假阳性.
- 使用Operetta®高内容成像系统和CellProfilerTM软件进行自动焦点检测和量化.
主要成果:
- 与Vero细胞相比,BHK-21细胞在检测所有DENV血清型的斑块和焦点方面表现出更高的灵敏度.
- 改进的FFA成功量化了DENV-4,这种血清型在传统测试中形成模糊的斑块.
- 开发的自动化工作流程在DENV量化方面表现出效率,并使用已知的DENV抑制剂 (NITD008) 进行了验证.
结论:
- 使用BHK-21细胞和自动成像的改进的聚焦形成试验为DENV量化提供了灵敏和高效的方法.
- 该协议可以提高对DENV-4等具有挑战性的DENV血清型的检测,并减少错误阳性.
- 该试验适用于抗病毒化合物查,包括高通量查 (HTS) 应用.
